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D-荧光素的一些知识问答!

D-荧光素的一些知识问答!

发布时间:2020-05-28

Q1: 荧光素的纯度对实验有成影响吗?

A有影响。99%以上的纯度较好。

Q2: 甲虫荧光素和萤火虫荧光素之间有区别吗?

A二者之间没有区别。

Q3: 如何溶解荧光素,其溶液稳定吗?

A荧光素钾盐在水中的溶解度为60 mg/ml,荧光素钠盐溶解度为100 mg/ml。荧光素游离酸是不溶于水的,但是在甲醇中的溶解度为10 mg/ml,在DMSO中溶解度为50 mg/ml。

荧光素钠盐和钾盐的水溶液短期内存放于-80℃,对实验效果没有明显影响。有实验证明,将荧光素溶解于脱氧中的水中会更稳定些。

对于一些较为敏感的试验,为了控制试验中的可变因素,较推荐新鲜配置的反应液 。例如,低浓度的荧光素酶或者并非最适的反应条件是需要高质量的底物才能进行反应

Q4: 荧光素钠盐和荧光素钾盐有什么区别?

A目前的研究没有发现二者在使用效果上的区别,仅在物理特征上有些小的差别,如荧光素钠盐溶解度会高于荧光素钾盐。但是在体内实验研究中,有更多的研究者倾向于选择荧光素钾盐,据不完全统计,选用钾盐的使用人是钠盐使用人的3倍。

Q5: 荧光素钠盐,荧光素钾盐,和荧光素游离酸之间有什么区别?

A游离酸不溶于水,在甲醇中的溶解度为10 mg/ml,在DMSO中溶解度为50 mg/ml,同样可用NaOHKOH弱碱去调节溶液的PH值。荧光素的钠盐或者钾盐在使用过程中会更方便,尤其是在体内成像实验中,因其能够溶解在水中,反应毒性也会更小些。

Q6: 为什么溶解荧光素钠盐或者钾盐的时候需用不含Ca2+Mg2+离子的PBS,有无别的盐溶液可用来溶解荧光素?

APBS,或者其他的磷酸盐缓冲液,或DPBS,常用来进行生物学研究或者细胞相关研究。PBS/DPBS为等渗溶液,PH7.2-7.6之间。DPBSPBS之间无差别,只是通常情况下,DPBS是不含钙镁离子。钙镁离子可能会抑制某些蛋白酶的活性。此外Mg2+是催化荧光氧化的重要因素,Ca2+是和腔肠素氧化有关的离子。其他的盐溶液也可用来溶解荧光素,但要避免溶液中的阳离对实验造成影响。

Q7: 荧光素酶的发光特性?

A荧光素腹腔注射老鼠后约1 min后,能够表达荧光素酶的细胞开始发光,10 min后强度达到稳定的最高点,在最高点持续约20-30 min后开始衰减,约3 h后荧光素排除,发光全部消失,最好的检测时间是在注射后15-35 min内。其动力学曲线如下图:

Q8: 怎么将荧光素注入小鼠体内,注射方法之间的区别是什么?

A荧光素可通过腹腔注射或尾部静脉注射注入小鼠体内。约1 min可扩散到小鼠全身。大部分情况下使用荧光素浓度为150 mg/kg。对于20 g的小鼠约使用3 mg的荧光素即可。对于腹腔注射来讲,扩散较慢,开始发光较慢,持续发光时间较长。对于荧光素的尾部静脉注射,扩散快,开始发光快,但发光持续时间较短。

Q9: 荧光素底物可以透过血脑屏障吗?

A荧光素底物约280道尔顿,荧光素的水溶性和脂溶性都非常好,很容易穿透细胞膜和血脑屏障。

Q10: 荧光素酶的表达稳定性如何?

A通过稳定筛选等过程,荧光素酶基因是能够插到细胞染色体内的。当细胞进行分裂、转移、分化时,荧光素酶也得到持续稳定的表达,荧光素酶的半衰期约为3 h,故只有活细胞才能持续表达荧光素酶。



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