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新手养细胞入门级注意事项

新手养细胞入门级注意事项

发布时间:2020-06-23

1.冷冻管应如何解冻?
取出冷冻管后,须立即放入 37 ℃ 水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在 1 分钟内全部融化,并注意水面不可超过冷冻管盖沿,否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时,必须注意安全,预防冷冻管的爆裂。

2。细胞冷冻管解冻培养时,是否应马上去除 DMSO?
除少数特别注明对 DMSO 敏感的细胞外,绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞),在解冻之后,应直接放入含有 10~15 ml 新鲜培养基的培养角瓶中,待隔天再置换新鲜培养基以去除 DMSO 即可,如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附的问题。
 
3。可否使用与原先培养条件不同的培养基?
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基,若骤然使用和原先提供培养条件不同的培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活。

4.可否使用与原先培养条件不同的血清种类?

不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。

5.何谓 FBS,FCS,CS,HS?
FBS (fetal bovine serum) 和 FCS (fetal calf serum) 是相同的意思,两者都是指胎牛血清, FCS 是错误的使用字眼,请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS ( 则是指马血清。

6.培养细胞时应使用 5% 或 10% CO2?或根本没有影响?

一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为 pH 的缓冲系统,而培养基中 NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的 CO2 浓度。当培养基中 NaHCO3 含量为每公升 3.7 g 时,细胞培养时应使用 10% CO2;当培养基中 NaHCO3 为每公升 1.5 g 时,则应使用 5% CO2 培养细胞。

7.何时须更换培养基?培养基中是否须添加抗生素?
视细胞生长密度而定,或遵照细胞株基本数据上的更换时间,按时更换培养基即可。
除于特殊筛选系统中外,一般正常培养状态下,培养基中不应添加任何抗生素。
一 ℃ 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽 vapor phase 长期储存。


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